lezione 5

Enzimologia
clinica nella
semeiotica e
diagnostica di
laboratorio
ENZIMOLOGIA CLINICA 6
•Il fegato e i test di funzione epatica
•Il rene e i test di funzione renale
•Bilancio idro-elettrolitico
•Apparato cardiovascolare
•Test per la val.ne del metabolismo glicidico
•Test per la val.ne del metabolismo lipidico
•Enzimologia
•Sistema immunitario
•Sangue e sistema ematopoietico
•Proteine del a fase acuta
FASE PREANALITICA
•Prelievo
FASE PREANALITICA
•Accettazione
•Etichettatura
Tecnica di prelievo sbagliata:
•Sieraggio
•Prelievo ematico non a digiuno
•Aliquotazione
•Prelievo ematico attraverso il deflussore di una fleboclisi
FASE
•Prelievo ematico in corso di terapia infusiva
•Tourniquet applicato per troppo tempo
ANALITICA
Campione non idoneo:
•Hb glicosilata (siero)
•Curva da carico glicidico (normali provette da sierologia)
•Campione prelevato da troppe ore
CQ
•Campione conservato in maniera inadeguata
•Emolisi (Kaliemia, Enzimi)
•Iperbilirubinemia estrema
REFERTAZIONE
•Validazione del referto
•Aggiornamento del database
•Backup
•Copia di referto storico
1

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CQ: precisione
Levey-Jennings plot
Se il risultato è compreso tra ± 2sd accetta il risultato; tuttavia se uno
dei due control i è compreso entro ± 2s e l’altro si col oca tra ± 2 e ± 3
s, considerare quanto segue.
•Regola 13s: se 1 control o eccede x ± 3 s, rifiuta il risultato (probabile
errore casuale)
•Regola 22s: se 2 control i consecutivi eccedono x ± 2 s, rifiuta il
risultato (probabile errore sistematico)
•Regola R4s: se la differenza tra 2 control i è uguale o superiore a 4s,
rifiuta il risultato (R è la differenza tra 2 sieri di control o) (probabile
errore casuale)
•Regola 41s: se 4 control i consecutivi eccedono la stesso limite x ± s,
rifiuta il risultato (probabile errore sistematico)
•Regola 10 x: se 10 control i consecutivi cadono da un lato di x (o “+“
o ”-”) rifiuta il risultato (probabile errore sistematico)
CQ: accuratezza
Proficient; skil ed, expert
Proficiency; being proficient; performing
Per chi ne volesse saperne di più...
a work with competence gained with skil s
and practice
Legge regionale 19 maggio 1988, n. 24.
Sistema di controllo di qualita' regionale sui laboratori di analisi cliniche.
(B.U. 25 maggio 1988, n. 21)
Art. 1, 2, 3, 4, 5
Art. 1.
http://arianna.consiglioregionale.piemonte.it/base/leggi/l1988024.html
2

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Test di laboratorio per le
FASE ANALITICA
•Il fegato e i test di funzione epatica
patologie
epatopancreatiche
Epatiti acute virali
ENZIMI
(inversione del e T.)
Transaminasi
(GPTALT/GOTAST)
LDH
Epatiti tossiche e iatrogene
?-GT
AP
D.D. con osteopatie
Bilirubinemia totale e
frazionata
D.D. con patologia pancreatica
•Amilasi
•Lipasi
DD con Macroamilasemia!
• N. Congenite
Il rene e i test di
• GN
funzione renale
Correlazione tra la
• Litiasi
creatininemia e la
• N. vascolari
clearance del a creatinina
• N. tubulari
• IRA
• IRC
Correlazioni fisiopatologiche:
• Sindrome epatorenale
Profilo renale
•Creatinina
•Urea
•Ac. Urico
Indicazione al a terapia dialitica
ELETTROLITI (in partic.)
•Fosfato
•Calcio
Problema del ’iperparatiroidismo secondario
•K+
3

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Il rene
Evoluzione e complicanze:
• Anemia
FASE ANALITICA
• Cardiopatia ischemica e IMA
100
•Test di valutazione del metabolismo glicidico
• Iperparatiroidismo sec.
•Glicemia a digiuno
10
•Curva glicemica dopo carico
)
•Fruttosamina
Verificare idoneità del prelievo
(
%
•Hb glic
1
r
t
a
l
i
t
y

o
a
l

M
u
n 0.1
Interferenze in caso di emoglobinopatie
n
A
0.01
Evoluzione e complicanze
•Microangiopatia
•Vasculopatia
25- 34 35- 44 45 - 54 55 - 64 65-74 75- 84 >85
Age (years)
Prevenzione
IMA: Profilo
&
enzimologico.
Diagnostica
A -Non modificabili
CV
Fattori di rischio
B - Modificabili
• Iperlipemia
• Diabete
• Ipertensione
• Abitudini di vita
• Etc.
4

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FASE ANALITICA
• Immunoturbidimetria (ITA)
•Test di valutazione del metabolismo lipidico
• Colesterolemia
• Trigliceridemia
Dosaggio di
• Colesterolo/HDL
proteine
Idoneità del prelievo rispetto al a
Specifiche
prescrizione del digiuno
•Immunoglobuline
•Fattori del complemento
•Albumina
•Ferritina
•Trasferrina
•Proteina C reattiva
•B2 microglobulina
Lipasi
•A1antitripsina
?
•Catene leggere
•Aptoglobina
•Ceruloplasmina
•Etc.
IMMUNOTURBIDMETRIC ASSAY (ITA)
METODI IMMUNOMETRICI ENZIMATICI
HETEROGENEOUS
ENZYME
Problemi in immunoturbidimetria:
IMMUNOASSAY
• Immunoturbidimetria (ITA)
• Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA)
• Enzyme Immunoassay (EIA)
• Radioimmunoassay (RIA)
Fluorescent
• Enhanced Chemoluminescence (ECL)
ImmunoAssay
• Microparticle Capture Enzyme Immunoassay (MEIA)
(FIA)
• Fluorescence Polarization Immunoassay (FPIA)
HOMOGENEOUS
ENZYME
IMMUNOASSAY
E
5

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A Fluorescent
HETEROGENEOUS ENZYME IMMUNOASSAY
CHEMILUMINESCENCE (or "CHEMOLUMINESCENCE")
ImmunoAssay
is the emission of light (luminescence) without emission of heat as
•Microparticle Capture Enzyme Immunoassay (MEIA)
(FIA)
the result of a chemical reaction.
Given reactants A and B, with an excited intermediate ?, we have:
[A] + [B] ?[?] ?[Products] + light
For example, if [A] is luminol and [B] is hydrogen peroxide in the presence of a
suitable catalyst we have:
luminol + H O ?3-APA[?] ?3-APA + light
2
2
where:
•3-APA is 3-aminophtalate
•3-APA[?] is the excited state ?uorescing as it decays to a lower energy level.
The decay of the excited state[?] to a lower energy level is responsible for the emission of light.
In theory, one photon of light should be given off for each molecule of reactant, or Avogadro’s
number of photons per mole.
4-Methylumbel iferyl Phosphate (MUP)
In actual practice, non-enzymatic reactions seldom exceed 1% QC, quantum ef?ciency.
4-Methylumbel iferyl (MU)
HETEROGENEOUS ENZYME IMMUNOASSAY
• Enhanced Chemoluminescence (ECL)
ENZIMI: SPECIFICITA’
Dosaggio combinato di:
• GOT
• due o più enzimi
• enzimi ed altri analiti
• CPK
• LDH
• AP
• Amilasi
Isoenzimi
Interferenze ed artefatti
• Emolisi (in vitro)
• Farmaci (in vivo)
• A horseradish peroxidase molecule (HRP) is tethered to the molecule of interest (usually by
• Prep.ne del CQ
immunoglobulin staining).
• This then locally catalyzes the conversion of the ECL reagent into a sensitized reagent, which on
further oxidation by hydrogen peroxide, produces a triplet (excited) carbonyl which emits light when it
decays to the singlet carbonyl.
6

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Aggiornamento & survey
FASE DI REFERTAZIONE
Sicurezza
Bkup elettronico
• Rapp. Costi/Qualità
Validazione
LINEA EMATICA !
• Miglioramento output
• Miglioramento throughput
• Troubleshooting
• Ridef.ne unità di misura
Trattamento e consegna dei referti
Aggiornamento metodiche
• Qualità totale
DATI SENSIBILI !
Validazione elettronica
Control o di congruità:
• manualmente
Aggiornamento profili
• duplicati
Refertazione unica
NUOVA METODICA ?
Costi/Benefici
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http://www.chem.uniroma1.it/~bottari/Opportunita.html
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